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支原體污染細胞常用清除方法
點擊次數(shù):1545 更新時間:2022-04-13

  支原體污染細胞后,有必要清除支原體,常用方法有:

1、對于非重要的細胞,如培養(yǎng)中的細胞、WCB的細胞等,將培養(yǎng)物與用過的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對于較為重要的細胞,如來源珍貴或?qū)嶒炇抑屑毎2亓枯^小等可以采用以下(2)-(8)的方法。

2、用MRA處理:用支原體清除劑(Mycoplasma Removal Agent)處理細胞,作用濃度為 25μg/ml,兩周可以清除支原體。

3、用清洗純化法清除支原體污染的方法:細胞營養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細胞群的篩選→細胞清洗→反復(fù)離心洗滌,其原理是利用離心力、細胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達到清除支原體的目的。由于支原體個體小且除發(fā)酵支原體外多為細胞外寄生,所以通過反復(fù)洗滌細胞和低速離心換液使其中潛在的支原體數(shù)量降低至ji 限. 如結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用,可達到更好的效果。

4、藥物輔助加溫處理:先用藥物處理后,再將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細胞有不良影響。

5、使用支原體特異性血清:用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個月后仍為陰性。

6、動物體內(nèi)接種除菌法:把受支原體污染的腫瘤細胞接種在同種動物皮下或腹腔中,借動物免疫系統(tǒng)消滅支原體,而腫瘤細胞卻能在體內(nèi)繼續(xù)生長,待一定時間后,從體內(nèi)取出細胞再進行培養(yǎng)繁殖。

7、巨噬細胞吞噬法:從動物腹腔采取巨噬細胞,為排除其它細胞成分,可先進行純化,然后再加入被支原體污染的細胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中,為檢查支原體是否已被消除干凈,可利用支持物培養(yǎng)法驗證,取出支持物逐日染色、鏡檢觀察,至支原體已被消除干凈為止。

8、使用支原體清除培養(yǎng)基,每2~3天更換1次新鮮培養(yǎng)液,換液時用無菌的平衡鹽溶液洗滌細胞1~2次;期間如果細胞密度過大,請保持細胞密度適當(dāng)(貼壁細胞可能需要用胰酶消化),并更換新的培養(yǎng)器皿,3天之后,即可見明顯清除效果;處理15天后,可以用支原體檢測試劑盒進行檢測,檢測支原體是否殺滅*;如果仍有支原體殘留,可以考慮再處理6天;為避免細胞再次受到“支原體"的污染,以后每隔1個月進行支原體的常規(guī)檢測,以保證沒有新的支原體污染。

注:支原體污染時細胞表現(xiàn)為長得不好,也不死亡,同時,培養(yǎng)基又是清亮的,時間長達一周也沒有什么變化,這時基本上可以判斷出是支原體污染了。


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