无码人妻AV一二区二区三区,熟妇人妻VA精品中文字幕,在线观看韩国电影,搡老熟女国产

產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

首頁(yè) > 技術(shù)與支持 > PCR技術(shù)溫度與時(shí)間的把控解說
PCR技術(shù)溫度與時(shí)間的把控解說
點(diǎn)擊次數(shù):1691 更新時(shí)間:2023-03-13

    溫度與時(shí)間的設(shè)置: 基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法,雙鏈DNA在90~95℃變性,再迅速冷卻至40 ~60℃,引物退火并結(jié)合到靶序列上,然后快速升溫至70~75℃,在Taq DNA 聚合酶的作用下,使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長(zhǎng)度為100~300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法, 除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一,一般采用94℃變性,65℃左右退火與延伸(此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性)。
1、變性溫度與時(shí)間:

變性溫度低,解鏈不wan全是導(dǎo)致PCR失敗的最主要原因。一般情況下,93℃~94℃lmin足以使模板DNA變性,若低于93℃則需延長(zhǎng)時(shí)間,但溫度不能過高,因?yàn)楦邷丨h(huán)境對(duì)酶的活性有影響。此步若不能使靶基因模板或PCR產(chǎn)物wan全變性,就會(huì)導(dǎo)致PCR失敗。

2、退火(復(fù)性)溫度與時(shí)間:

退火溫度是影響PCR特異性的較重要因素。變性后溫度快速冷卻至40℃~60℃,可使引物和模板發(fā)生結(jié)合。由于模板DNA 比引物復(fù)雜得多,引物和模板之間的碰撞結(jié)合機(jī)會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于模板互補(bǔ)鏈之間的碰撞。退火溫度與時(shí)間,取決于引物的長(zhǎng)度、堿基組成及其濃度,還有靶基序列的長(zhǎng)度。對(duì)于20 個(gè)核苷酸,G+C含量約50%的引物,55℃為選擇最適退火溫度的起點(diǎn)較為理想。引物的復(fù)性溫度可通過以下公式幫助選擇合適的溫度:
Tm值(解鏈溫度)=4(G+C)+2(A+T)
復(fù)性溫度=Tm值-(5~10℃)
在Tm值允許范圍內(nèi), 選擇較高的復(fù)性溫度可大大減少引物和模板間的非特異性結(jié)合,提高PCR反應(yīng)的特異性。復(fù)性時(shí)間一般為30~60sec,足以使引物與模板之間wan全結(jié)合。

3、延伸溫度與時(shí)間:

Taq DNA聚合酶的生物學(xué)活性:
70~80℃ 150 核苷酸/S/酶分子
70℃ 60 核苷酸/S/酶分子
55℃ 24 核苷酸/S/酶分子
高于90℃時(shí), DNA 合成幾乎不能進(jìn)行。
PCR反應(yīng)的延伸溫度一般選擇在70~75℃之間,常用溫度為72℃,過高的延伸溫度不利于引物和模板的結(jié)合。PCR延伸反應(yīng)的時(shí)間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,一般1Kb以內(nèi)的DNA片段,延伸時(shí)間1min是足夠 的。3~4kb的靶序列需3~4min;擴(kuò)增10Kb 需延伸至15min。延伸進(jìn)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增帶的出現(xiàn)。對(duì)低濃度模板的擴(kuò)增,延伸時(shí)間要稍長(zhǎng)些。


成人毛片A级毛片免费观看网站| 欧美群妇大交群| 久久强奷乱码老熟女网站| 久久久久亚洲AV成人片一区| 自拍偷自拍亚洲精品被多人伦好爽| 国产AV一区二区精品凹凸| 日本japanese丰满少妇| 久久久久久久久毛片精品| 国产成a人片在线观看视频下载 | 一本大道久久东京热无码av| 最近的2019免费中文字幕| 国产96在线 | 亚洲| 国产成人无码专区| 麻豆精品久久久久久久99蜜桃| 日本强好片久久久久久AAA| 亚洲精品无码mv在线观看| 中国少妇videos露脸hd| 好男人好资源在线观看免费视频| 最近中文字幕免费手机版| 一二三四在线观看免费中文吗| 狠狠久久精品中文字幕无码| 国产精品成人久久久久久久| 大肥女高潮bbwbbwhd视频| 久久无码专区国产精品s| 一个人免费观看WWW视频二| 亚洲AV极品无码专区在线观看| 国内大量揄拍情侣在线视频99| √天堂中文WWW官网在线| 国产亚洲精品美女久久久久久| 成人欧美一区二区三区1314 | av无码专区| 亚洲精品无码一区二区| 午夜精品久久久久久久久| 久久久久久精品免费a片| 色婷婷亚洲精品综合影院| 欧美激情一区二区三区| 欧洲国产伦久久久久久久| 人妻少妇看a偷人无码精品| 国产精品久久久久9999高清| 人妻少妇精品无码专区漫画| 岳把我用嘴含进满足我视频|